astaxanthin虾青素含量的测定方法:美国Cyanotech公司测定方法

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来源:虾青素品牌网 2019-07-14

在雨生红球藻的养殖中,需要测定虾青素含量,对雨生红球藻虾青素含量测定方法有4种,其中美国Cyanotech公司测定方法被广大科研人员采用。

将诱导后的藻液15000 r/min离心10 min,去上清液,收集藻渣,将藻渣放在培养皿中 然后置于烘箱中烘干至恒重,计算干重。用药匙将藻粉从培养皿上轻轻刮下,收集干藻粉。

陈晓飞,严小军 [30] 对雨生红球藻虾青素含量测定方法的探讨的结果表明,在常用的4种方法中(包括美国Cyanotech公司的测定方法、荆州天然虾青素有限公司的方法、氯仿-乙醇混合溶液提取测定方法以及高效液相色谱测定法),美国 Cyanotech公司的测定结果与HPLC法最接近,达到1.461%,在3 种分光光度法中测定效果最好,其他分别只达到了1.250%、1.317%。结合资料和现有的试验仪器及试验试剂,本次试验决定采用美国Cyanotech公司的测定方法,来检测诱导后的虾青素含量,具体的测定方法如下:

(1) 准确称量25 mg烘干后的藻粉,置于10 mL的离心管中。在离心管中加入5 mL DMSO,45℃~50 ℃水浴30 min,每10 min振荡15 s(共计3次)。6000 r/min离心10min,然后将上清液转入25 mL容量瓶中。

(2) 向离心管中加入5 mL丙酮,振荡30 s,6000 r/min离心10 min,再将上清液转入25 mL容量瓶中。重复操作至少3次,直至上清液基本无色(吸光值小于0.05)。向容量瓶中加入丙酮,定容至25 mL并将溶液振荡混合均匀。吸取5~7 mL放入离心管中,再次6000 r/min离心以除去前面步骤中带入的颗粒物.

(3) 在474 nm波长下测定最大吸光值,用丙酮作为空白对照,如果吸光值大于1.25,则必须用丙酮稀释后再测。

计算公式为:

类胡萝卜素质量(mg)=(最大吸光值A/250)×25 mL(丙酮)×稀释倍数

虾青素(%) = [类胡萝卜素质量(mg)/ 样品质量(mg)]×80%

虾青素(μg•mL-1)= (类胡萝卜素质量(mg) ×80%)/(25 mL×8)

参考文献

[30] 陈晓飞等. 红球藻虾青素含量测定方法的探讨[J]. 宁波大学学报(理工版), 2007, 20(4).

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